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細(xì)胞轉(zhuǎn)染,細(xì)胞轉(zhuǎn)染是為了干嘛

時間:2026-02-24    作者:admin 點擊: ( 1 ) 次

一:

細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)百科

問題1:感受態(tài)細(xì)胞的制備·轉(zhuǎn)化·細(xì)胞轉(zhuǎn)染·菌種培養(yǎng)相關(guān)方法及原理_百度知
答:7分裝保存(40%甘油與感受態(tài)細(xì)胞1:1混合,使甘油的終濃度為20%)。轉(zhuǎn)化1連接產(chǎn)物加入感受態(tài)中2冰上放置30分鐘342°90秒4冰上2-5分鐘5涂板~細(xì)胞轉(zhuǎn)染(這里說的是脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染,以六孔板為例,如果是。

問題2:什么細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法可以轉(zhuǎn)染thp-1細(xì)胞?
細(xì)胞轉(zhuǎn)染答:thp-1轉(zhuǎn)染48小時熒光圖片轉(zhuǎn)染條件:培養(yǎng)板:24孔板轉(zhuǎn)染試劑用量:電訊質(zhì)粒DNA用量:電訊轉(zhuǎn)染時間:48小時轉(zhuǎn)染試劑:AdvancedDNARNA轉(zhuǎn)染試劑培養(yǎng)基:z7180-500超低內(nèi)毒胎牛血清。

問題3:細(xì)胞轉(zhuǎn)染慢病毒好還是腺病毒好
答:1轉(zhuǎn)染效率:慢病毒較高2慢病毒可以實現(xiàn)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,腺病毒是瞬時轉(zhuǎn)染3包裝量:慢病毒可以包裝4kb左右,不超過8kb的外源基因,腺病毒可以包裝8kb左右外源基因4慢病毒操作較方便,周期也短。但腺病毒表達(dá)快,1-2天。

問題4:哪種細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率較高
答:個人經(jīng)驗,BHK、CHO是很常用的轉(zhuǎn)染用細(xì)胞,而且跟抗體非特異性反應(yīng)也不高。一般來說,大多數(shù)可傳代細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率都是可以的,還要考慮所用轉(zhuǎn)染劑的類型。不建議你用MDCK細(xì)胞,非常難轉(zhuǎn)染。

問題5:什么是細(xì)胞轉(zhuǎn)染
細(xì)胞轉(zhuǎn)染答:轉(zhuǎn)染(transfection)指真核細(xì)胞由于外源遺傳物質(zhì)摻入而獲得新的遺傳標(biāo)志的過程。如果摻入原核細(xì)胞叫轉(zhuǎn)化,使用病毒作為載體的叫感染。若此DNA未與宿主細(xì)胞DNA整合而獲表達(dá),稱“瞬時轉(zhuǎn)染(transienttransfection)”;若與宿主細(xì)胞。

問題6:怎樣高效率轉(zhuǎn)染DC(DC24)細(xì)胞?
答:高效率轉(zhuǎn)染DC(DC24)細(xì)胞,和大家分享下面文章;2020-1-13四川大學(xué)胃腸癌中心國家重點實驗室用美國invigentech英克INVIDNARNATransfectionReagent轉(zhuǎn)染試劑成功轉(zhuǎn)染DC24細(xì)胞(小鼠骨髓來源樹突狀細(xì)胞)發(fā)表文章已經(jīng)見刊;轉(zhuǎn)染體系:24。

問題7:293T細(xì)胞轉(zhuǎn)染
細(xì)胞轉(zhuǎn)染答:血清的存在會干擾siRNA與轉(zhuǎn)染試劑的混合,從而影響轉(zhuǎn)染效率。建議用來稀釋siRNA和稀釋轉(zhuǎn)染試劑的培養(yǎng)基是無血清培養(yǎng)基。我們實驗室前段剛用RFect,siRNA方法做完A549細(xì)胞,細(xì)胞的鋪板密度在45%左右,用的24孔板,每孔2ul試劑。

問題8:細(xì)胞轉(zhuǎn)染,挑單克隆
細(xì)胞轉(zhuǎn)染答:無限稀釋法,就是鋪到96板的一個孔,然后倍數(shù)稀釋下去,到最后就會有一個細(xì)胞的孔,還有就是細(xì)胞計數(shù),然后再鋪96孔,也會出現(xiàn)一個細(xì)胞,但是對于挑單克隆來說,我覺得沒必要單個細(xì)胞,單個細(xì)胞也不容易長起來,雖然挑克隆。

問題9:細(xì)胞轉(zhuǎn)染為什么不能加血清
答:傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)染試劑有一定的細(xì)胞毒性,在轉(zhuǎn)染過程由于提高細(xì)胞的通透性因而不能在培養(yǎng)基中添加抗生素。如,陽離子脂質(zhì)體。帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞。血清中含有大量的蛋白質(zhì),在轉(zhuǎn)染過程中。

問題10:懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染怎么做
答:jinghuanlv認(rèn)為:懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染還是有很大不同的。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的原理基于電荷吸引原理,先形成脂質(zhì)體-DNA復(fù)合物,散布在細(xì)胞周圍,然后通過細(xì)胞的內(nèi)吞作用,將目的基因?qū)爰?xì)胞內(nèi),而脂質(zhì)體復(fù)合物與貼壁細(xì)胞的接觸機(jī)會比。

二:

細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)資料

問題1:細(xì)胞轉(zhuǎn)染目的,轉(zhuǎn)染成功證明什么?有什么意義
答:細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA,RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展,轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能的常規(guī)工具。細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)有助于研究和控制真核細(xì)胞基因功能。在研究基因功能、調(diào)控。

問題2:細(xì)胞轉(zhuǎn)染是孵育的目的是什么什么
答:DNA與轉(zhuǎn)染試劑孵育的目的:DNA和轉(zhuǎn)染試劑結(jié)合形成DNA-轉(zhuǎn)染劑復(fù)合物。DNA-轉(zhuǎn)染劑復(fù)合物與細(xì)胞孵育的目的:細(xì)胞吸收DNA-轉(zhuǎn)染劑復(fù)合物,進(jìn)而DNA進(jìn)入細(xì)胞。

問題3:為什么原代培養(yǎng)的細(xì)胞難轉(zhuǎn)染?適合原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染的方法有哪些?
答:對原代培養(yǎng)的細(xì)胞,可以采用一下方法:非病毒載體,選擇比較好的轉(zhuǎn)染試劑,推薦QIAGEN的superfect轉(zhuǎn)染試劑,對原代細(xì)胞還可以。采用電轉(zhuǎn)。理論上任何細(xì)胞都可以通過電轉(zhuǎn),不足之處:需要電轉(zhuǎn)儀器,緩沖液非常有講究,不同細(xì)胞。

問題4:細(xì)胞轉(zhuǎn)染后,再培養(yǎng)7或8天收集細(xì)胞,那么長時間,細(xì)胞不就擠死了嗎_百度
答:細(xì)胞轉(zhuǎn)染可以:(1)真核細(xì)胞可以摻入外源DNA而獲得新的遺傳標(biāo)志;(2)應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因動植物;(3)應(yīng)用于生物制藥、基因治療、RNA干擾。脂質(zhì)體介導(dǎo)法實驗原理上圖所示是脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染的示意圖,它顯示了外源質(zhì)粒進(jìn)入細(xì)胞。

問題5:細(xì)胞轉(zhuǎn)染呈陽性是什么意思?
細(xì)胞轉(zhuǎn)染答:細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)是指將外源分子如DNA,RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展,轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能的常規(guī)工具。在研究基因功能、調(diào)控基因表達(dá)、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學(xué)試驗。

問題6:懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染怎么做
細(xì)胞轉(zhuǎn)染答:jinghuanlv認(rèn)為:懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染還是有很大不同的。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的原理基于電荷吸引原理,先形成脂質(zhì)體-DNA復(fù)合物,散布在細(xì)胞周圍,然后通過細(xì)胞的內(nèi)吞作用,將目的基因?qū)爰?xì)胞內(nèi),而脂質(zhì)體復(fù)合物與貼壁細(xì)胞的接觸機(jī)會比。

問題7:細(xì)胞轉(zhuǎn)染為什么要換無雙抗培養(yǎng)基?
細(xì)胞轉(zhuǎn)染答:影響細(xì)胞狀態(tài)吧,抗生素這種東西,即使是平時培養(yǎng)細(xì)胞的時候,能不加也最好不加,尤其是細(xì)胞轉(zhuǎn)染的時候,細(xì)胞更容易死,所以不要用雙抗。

問題8:U2OS細(xì)胞可以轉(zhuǎn)染嗎
細(xì)胞轉(zhuǎn)染答:可以。常用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法。脂質(zhì)體是磷脂分散在水中時形成的脂質(zhì)雙分子層,又稱為人工生物膜。陽離子脂質(zhì)體表面帶正電荷,能與核酸的磷酸根通過靜電作用將DNA分子包裹入內(nèi),形成DNA一脂復(fù)合體,也能被表面帶負(fù)電荷的細(xì)胞膜吸附。

問題9:細(xì)胞共轉(zhuǎn)染實驗的詳細(xì)步驟求助
細(xì)胞轉(zhuǎn)染答:一般細(xì)胞轉(zhuǎn)染可以分開轉(zhuǎn)染也可以共同轉(zhuǎn)染,就看你們課題組的選擇了。我們課題組遇到需要干擾兩個基因的時候都選擇用RFECE,SIRNA技術(shù)分開轉(zhuǎn)染,弊端就是開支會比共同干擾要高,這個也要看你們課題組的經(jīng)費情況。

問題10:細(xì)胞轉(zhuǎn)染目的,轉(zhuǎn)染成功證明什么?有什么意義
答:轉(zhuǎn)染一般是將目的基因構(gòu)建到某個載體,將構(gòu)建好的重組質(zhì)粒導(dǎo)入細(xì)胞中,這樣就能表達(dá)你所要的目的蛋白用于后續(xù)實驗轉(zhuǎn)染可以得到細(xì)胞中本身不表達(dá)的蛋白或是能提高某些蛋白表達(dá)量。

三 :

細(xì)胞轉(zhuǎn)染名企推薦

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